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僅需十分鐘，配制RNA轉(zhuǎn)染復(fù)合液；僅需6-48小時(shí)即可進(jìn)行檢測(cè)

詳實(shí)研究數(shù)據(jù)

1. 荷瘤小鼠靜脈給藥遞送Cy5-siRNA的組織分布考察

C57BL/6J小鼠，腋下注射5×10⁵/100 μL CT26細(xì)胞成瘤，腫瘤體積約300~500 mm³時(shí)，單次靜脈注射CALNP? RNA in vivo轉(zhuǎn)染試劑+Cy5-siRNA復(fù)合液（1 mg/kg），給藥后1 h即可在各臟器觀察到大量Cy5熒光信號(hào)，其中肝臟熒光最高并達(dá)到峰值，后續(xù)Cy5熒光信號(hào)在給藥6 h后持續(xù)可見(jiàn)。其它如脾和腫瘤亦有顯著熒光分布。

2. C57BL/6J小鼠靜脈給藥遞送siRNA敲低肝臟目標(biāo)mRNA的研究

CALNP^? RNA in vivo轉(zhuǎn)染試劑與TTR或Factor VII的siRNA形成轉(zhuǎn)染復(fù)合液通過(guò)小鼠尾靜脈注射，給藥后24 h可檢測(cè)到肝臟TTR或FVII的mRNA呈劑量依賴(lài)性的敲低作用，而這種劑量相關(guān)性與CALNP^? RNAi in vitro體外轉(zhuǎn)染試劑在原代肝細(xì)胞中的敲低效應(yīng)有明顯相關(guān)性，為體外序列篩選和體內(nèi)敲低效應(yīng)提供了參考。

注：原代肝細(xì)胞體外轉(zhuǎn)染條件為原代小鼠肝細(xì)胞15萬(wàn)/0.5 ml種于24孔板，種板后，按照CALNP^? RNAi in vitro轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)加入siRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合液，轉(zhuǎn)染24h后，mRNA水平檢測(cè)。

小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染條件為6~8周C57BL/6J雌性小鼠，按照CALNP^? RNA in vivo轉(zhuǎn)染試劑說(shuō)明書(shū)尾靜脈注入RNA轉(zhuǎn)染復(fù)合液，轉(zhuǎn)染24h后，取肝臟測(cè)定mRNA水平（n=6）

3. C57BL/6J小鼠靜脈給藥遞送mRNA

CALNP? RNA in vivo轉(zhuǎn)染試劑與Fluc-mRNA形成轉(zhuǎn)染復(fù)合液通過(guò)小鼠尾靜脈注射，給藥后24 h可檢測(cè)到小鼠肝臟表達(dá)Luciferase，給予底物熒光素后可在體和離體檢測(cè)到熒光素產(chǎn)生的生物發(fā)光。

4. C57BL/6J小鼠局部給藥遞送mRNA（局部肌肉注射和肺部氣管給藥）

CALNP? RNA in vivo轉(zhuǎn)染試劑與Fluc-mRNA形成轉(zhuǎn)染復(fù)合液局部肌肉注射在小鼠后腿，給藥后6 h可檢測(cè)到小鼠腿部肌肉表達(dá)Luciferase，給予底物熒光素后可在體和離體檢測(cè)到熒光素產(chǎn)生的生物發(fā)光。

5. 體內(nèi)系統(tǒng)給藥安全性數(shù)據(jù)

CALNP? RNA in vivo轉(zhuǎn)染試劑與Negative Control-siRNA形成轉(zhuǎn)染復(fù)合液通過(guò)小鼠尾靜脈注射，給藥后6 h時(shí)間點(diǎn)取血檢測(cè)，相較于空白組，給藥組未觀察到任何血液生化變化。